自身免疫性溶血性贫血（AIHA）是由于免疫调节功能紊乱产生自身抗体或活化的补体，结合于红细胞表面，致使红细胞加速破坏而引起溶血性贫血的自身免疫性疾病。
红细胞抗体分为IgG、IgM、IgA。Coombs试验分为间接与直接两种，直接试验可以检测红细胞表面的不完全抗体，间接试验目的是检测血清中的不完全抗体。临床一般依赖于Coombs直接试验（DAT）阳性作为诊断AIHA的必备条件，但其实临床上也偶尔会出现Coombs阴性的AIHA患者。
AIHA患者为什么会出现coombs试验阴性的情况？
1.自身抗体为免疫球蛋白A或M
在大部分情况下，IgA或IgM分子伴随IgG抗体和补体C3作为自身红细胞抗体，引起AIHA。而临床用于coombs实验的抗人球蛋白血清为用人纯化IgG或补体C3免疫家兔制备的抗人球蛋白或补体C3的单价抗血清，只能检测IgG型红细胞自身抗体或C3。因此，Coormbs试验无法有效识别由IgA型或IgM型自身抗体导致的AIHA，检查结果呈假阴性。
2.红细胞表面免疫球蛋白数量过低
正常个体的红细胞表面只吸附少量IgG分子，其吸附的IgG分子数量一般低于35个/红细胞。AIHA患者的红细胞表面则通常吸附大量IgG分子，且绝大部分AIHA患者Coombs试验检测结果呈阳性。
传统试管法coombs试验试剂的检测范围大部分要求IgG分子数量≥个/红细胞，而许多研究证实，即使在自身抗体IgG分子数量低于个/红细胞时，部分患者仍可表现出明显的溶血性贫血。
若红细胞表面自身抗体分子数低于传统试管法Coombs试验试剂的检测阈值，则应用该方法检测时，不能生成可见的红细胞凝集反应，呈现假阴性结果，这是由于该方法的灵敏度相对较低导致。
3.红细胞低亲和力的自身免疫球蛋白G抗体
低亲和力的IgG抗体可以引起Coombs试验阴性。低亲和力的自身抗体与红细胞表面抗原结合较弱，在常温条件下进行常规Coombs试验洗涤红细胞过程中，容易从红细胞表面脱落，从而导致Coombs试验检查结果呈假阴性。
而在4C的低温条件下洗涤该类患者的红细胞，可减少标本处理过程中抗体洗脱，保证Coombs试验检测结果呈阳性。低亲和力的自身抗体虽然与红细胞表面抗原结合较弱，体外处理过程中容易被洗脱，但在体内仍旧可能引发严重的溶血反应。
4.自然杀伤细胞介导的自身免疫性溶血性贫血
自然杀伤（NK）细胞介导的AIHA非常少见，此类患者的红细胞溶血发生由淋巴细胞直接导致，而非依赖于自身抗体。因此其基于红细胞自身抗体检测的Coombs试验必然呈阴性结果。
此外，Coombs试验呈阴性AIHA的可能原因还有非免疫因素导致的溶血、药物诱导的溶血，试验方法不当或使用试剂失效等，导致Coombs试验呈假阴性。由于常规试管法coombs试验灵敏度较低以及AIHA疾病本身的特征，部分AIHA患者可能会表现为Coombs试验呈阴性的结果，但患者的临床表现、血象变化、治疗选择以及预后等方面与Coombs试验呈阳性AIHA患者相似。合理运用实验室检查可辅助诊断Coombs试验呈阴性AIHA。
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